人促胰島生長素(betatrophin)elisa試劑盒

　　本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

　　本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人促胰島生長素(betatrophin)的含量。

　　有效期：6個(gè)月

　　保存條件：2-8℃

　　試劑盒組成：

　　備注：

　　1.(96T/48T)打開包裝后請(qǐng)及時(shí)檢查所有物品是否齊全。

　　2.標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：800、400、200、100、50、25 ng/L

　　3.經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)，可用ye將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

　　檢測(cè)前準(zhǔn)備工作：

　　1.請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

　　2.從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象;放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

　　3.20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

　　實(shí)驗(yàn)原理：

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人胰島生長素(betatrophin)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人胰島生長素(betatrophin)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測(cè)定吸光度(OD 值)，計(jì)算樣品濃度。

　　實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材：

　　1.酶標(biāo)儀(450nm)

　　2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3.37℃恒溫箱

　　4.蒸餾水或去離子水

　　人促胰島生長素(betatrophin)ELISA試劑盒樣本處理及要求：

　　1.血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果)，稱重后將組織jian碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

　　4.細(xì)胞培養(yǎng)物上清：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　5.其它生物標(biāo)本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)。

　　6.樣品外觀：樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

　　7.樣品保存：樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè))，或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測(cè))，避免反復(fù)凍融，標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

　　注意事項(xiàng)：

　　1.嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

　　2.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

　　3.消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

　　4.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

　　5.避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

　　6.在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

　　7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

　　8.任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

　　9.不能使用過期產(chǎn)品。

　　10.如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。

　　操作步驟：

　　1.從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。

　　3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。

　　4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

　　5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算：

　　繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

　　人促胰島生長素(betatrophin)ELISA試劑盒性能：

　　1.檢測(cè)范圍：25 ng/L – 800 ng/L。

　　2.靈敏度：檢測(cè)濃度小于1.0 ng/L。

　　3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

　　4.重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

　　技術(shù)小提示：

　　1.當(dāng)混合或重溶蛋白溶液時(shí)，盡量避免起沫。

　　2.為了避免交叉感染，配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請(qǐng)分別使用不同的移液槽。

　　3.每次孵育時(shí)，請(qǐng)正確使用封板膠可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

　　4.混合后的顯色底物在上板前應(yīng)為無色，請(qǐng)避光保存;假如微孔板后，將由物色變成不同深度的藍(lán)色。

　　5.終止液上板順序應(yīng)同顯色底物上板順序一致;加入終止液后，孔內(nèi)顏色由藍(lán)變黃;若孔內(nèi)有綠色，則表明孔內(nèi)液體未混勻;請(qǐng)充分混合。

　　人促胰島生長素(betatrophin)elisa試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。