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關于超濾管的常見問題與解答
Q:超濾管的膜材質是什么?
A:超濾管的膜材質為密理博的Ultracel再生纖維素膜,生產工藝嚴格,截留分子量明確而準, 蛋白吸附損失小。
Q:如果要用超濾的方法分離兩種蛋白,那么這兩個蛋白的大小需要相差多少?
A:按照經驗,建議兩個蛋白的分子量要相差 一個數量級(10倍)。
Q:超濾管可以用酒精消毒滅菌么?
A: 超濾管與70%乙醇是兼容的,但是對滅菌處理的具體方法沒有做相關的測試,所以無法提供更進一步的參考信息。
Q:超濾裝置是否可以用于高壓滅菌?
A: 超濾管都是采用熱封設計,不可以用高壓高溫滅菌。
Q:蛋白在濃縮時出現了沉淀,如何改進?
A:蛋白如果濃縮過快或者過度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。建議蛋白濃縮后的 濃度不超過20mg/ml.對于對濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白,建議的改進方法是:
1)離心力降為推薦離心力的30%-50%
2)改用截留分子量大的超濾管(如原本選用10k,此時可以選擇30k)
3)在濃縮過程中取出超濾管, 用吸頭反復吹吸幾次后再繼續濃縮
Q:濃縮后發現濃縮液中沒有目的蛋白,可能的原因有哪些?
A:首先,超濾管的蛋白起始濃度為25ug/ml.請確保樣本的起始濃度大于這個濃度。其次,如果問題仍然出現,請不要丟棄樣本濾過液以便用于分析可能的原因:
1)如果目的樣本在濾過液中,那么請排查: .
a)是否選擇了合適截留分子量的超濾管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?
b)使用的離心力是否是在限定范圍內?如果使用的是rpm,請換算成相應的g離心力,具體換算方
法請垂詢。
c) 離心機最近是否有校準過?
Q:有時候用超濾離心管連水都離不下來,可能是什么原因?
A:超濾膜中含有微量甘油。如果出現這種情況,請先用0.1 N NaOH清洗再離心。最后用緩沖液或Milli-Q@水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應立即使用,如暫時不用,請保持潤濕狀態,避免重新干燥。
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